产品货号：
BTN91108
中文名称：
T3体外转录试剂盒
英文名称：
T3 in vitro Transcription Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒是基于沙门氏噬菌体T3 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒，它利用含有T3启动子的模版DNA，以NTP为底物，从T3启动子下游开始合成与模板DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。
产品特点：
1.即开即用，用户只需提供含T3启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需耍单独准备每一个成份。
2.单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。
3.模板DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到5000nt之问。
5.产品配方经过精心优化，每μg DNA模板可以合成2～6μg RNA。
6.得到的RNA可以用于RNA结构研究、核解生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。
试剂盒组成：
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
一、制备DNA模板
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点：
1)必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
2)是需要转录的DNA序列的上游必须有T3启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将T3启动子序列(5′AATTAACCCTCACTAAAGG 3′)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有T3启动子的载体，并且克隆位点必须位于T3启动子下游。
3)是需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3′突出。如果是3′突出(如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。
4)是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。
二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：
注：此为20μL反应体系的用量，对其他体积的反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要定做NTP分开而不是NTP预先混合的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸(本公司有各种加帽修饰核苷酸)。
2.37℃保温1～2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。
3.70℃加热10分钟灭活T3 RNA聚合酶。
4.取1～3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成5～10μg的RNA。
5.得到的RNA可以放-80℃保存。
若需进一步去除DNA模板，可参考下列操作步骤，但所用试剂需另行购买，本试剂盒不提供。
1.在体外转录结束后，在反应体系中加入3～5U自备的RNase-free DNase(BTN90903；3～5U/μL)。
2.37℃保温15～30分钟。
3.补水到100μL，
4.用自备的等体积(100μL)的Tris饱和酚-氯仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5.在上清中加200μL自备的微量核酸沉淀剂(BTN50903；用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
6.加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
7.短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。
8.晾干半分钟，所得沉淀即去除DNA模板后的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。
疑难解答：
1、没有RNA产物。最常见原因是DNA模板有RNase污染，测试方法是用纯化的RNA跟模板DNA一起保温，再检测RNA是否降解。本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染严重，可能需要用户补加RNase inhibitor。
2、RNA产量低。最常见的原因是DNA模板序列。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G，在前14个碱基内避免有U存在。
3、RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有T3 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6或T7体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6或T7启动子)。
4、RNA长度比预计的长。T3 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板又是质粒DNA，则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5、5′单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长(如12小时)，则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则T3 RNA聚合酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5′端是单磷酸的比例将大大增加。
相关搜索：T3体外转录试剂盒，T3 in vitro Transcription Kit
产品特点：
1.即开即用，用户只需提供含T3启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需耍单独准备每一个成份。
2.单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。
3.模板DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到5000nt之问。
5.产品配方经过精心优化，每μg DNA模板可以合成2～6μg RNA。
6.得到的RNA可以用于RNA结构研究、核解生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| 转录预配液(2×) | 0.5mL |
| 阳性对照DNA(1.3 Kb片段) | 20μL(10ng/μL) |
| T3 RNA聚合酶混合液 | 50μL |
| RNase-free水 | 1mL |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
一、制备DNA模板
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点：
1)必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
2)是需要转录的DNA序列的上游必须有T3启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将T3启动子序列(5′AATTAACCCTCACTAAAGG 3′)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有T3启动子的载体，并且克隆位点必须位于T3启动子下游。
3)是需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3′突出。如果是3′突出(如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。
4)是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。
二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：
| 成分 | 加入量 | 备注 |
| DNA模板 | xμl | 总量在50ng～1μg(如果模板是PCR片段，建议用50ng左右；如果模板是质粒DNA，建议用1μg左右；如果用本制品提供的阳性对照，建议用4μL) |
| 转录预配液，2× | 10μL | 需室温时使用 |
| T3 RNA聚合酶混合液 | 1μL | 本成分还含其他促进剂，所以是混合物 |
| RNase-free水 | 补水到20μL |
注：此为20μL反应体系的用量，对其他体积的反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要定做NTP分开而不是NTP预先混合的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸(本公司有各种加帽修饰核苷酸)。
2.37℃保温1～2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。
3.70℃加热10分钟灭活T3 RNA聚合酶。
4.取1～3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成5～10μg的RNA。
5.得到的RNA可以放-80℃保存。
若需进一步去除DNA模板，可参考下列操作步骤，但所用试剂需另行购买，本试剂盒不提供。
1.在体外转录结束后，在反应体系中加入3～5U自备的RNase-free DNase(BTN90903；3～5U/μL)。
2.37℃保温15～30分钟。
3.补水到100μL，
4.用自备的等体积(100μL)的Tris饱和酚-氯仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5.在上清中加200μL自备的微量核酸沉淀剂(BTN50903；用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
6.加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
7.短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。
8.晾干半分钟，所得沉淀即去除DNA模板后的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。
疑难解答：
1、没有RNA产物。最常见原因是DNA模板有RNase污染，测试方法是用纯化的RNA跟模板DNA一起保温，再检测RNA是否降解。本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染严重，可能需要用户补加RNase inhibitor。
2、RNA产量低。最常见的原因是DNA模板序列。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G，在前14个碱基内避免有U存在。
3、RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有T3 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6或T7体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6或T7启动子)。
4、RNA长度比预计的长。T3 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板又是质粒DNA，则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5、5′单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长(如12小时)，则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则T3 RNA聚合酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5′端是单磷酸的比例将大大增加。
相关搜索：T3体外转录试剂盒，T3 in vitro Transcription Kit